Sylphium molecular ecology heeft verschillende kits ontwikkeld om met zo min mogelijk handelingen de meest gevoelige en betrouwbare eDNA-bepalingen te kunnen uitvoeren. Met deze kits kan het hele proces van bemonstering, eDNA-extractie tot de qPCR-analyse worden uitgevoerd. Het werk met deze kits moet worden uitgevoerd in een laboratorium dat speciaal is ingericht voor eDNA-werk. Sylphium geeft volledige ondersteuning bij het opzetten van een dergelijk eDNA-lab. Als u ge\u00efnteresseerd bent in deze cursussen en ondersteuning, neem dan contact met ons op.<\/p>\n\n\n\n
Door de extreem hoge gevoeligheid van de qPCR-methode kan de kleinste DNA verontreiniging al een groot probleem zijn. Positieve controles en amplificatieproducten van de PCR (post-PCR) bevatten grote hoeveelheden specifieke DNA-fragmenten en zijn daarom belangrijke potenti\u00eble bronnen van besmetting. Het is belangrijk om de laboratoriumactiviteiten zo te organiseren dat het risico op besmetting wordt geminimaliseerd<\/p>\n\n\n\n
Om de kans op besmetting bij het gebruik van PCR te minimaliseren, is het advies om twee fysiek gescheiden ruimtes te gebruiken:<\/p>\n\n\n\n
De ruimte voor het bereiden van reagentia wordt gebruikt voor de bereiding en opslag van PCR-reagentia. In deze ruimte wordt de PCR-mix samengesteld en verdeeld over de reactiecupjes van een PCR-plaat. Na het vullen wordt de plaat afgedekt en naar de monstervoorbereidingsruimte getransporteerd.<\/p>\n\n\n\n
De monstervoorbereidingsruimte is bedoeld voor het extraheren van DNA uit monsters en het toevoegen van positieve en negatieve controles aan de qPCR-mix. Het ge\u00ebxtraheerde DNA wordt in deze ruimte ook toegevoegd aan de qPCR-mix. Voorzichtigheid is geboden bij het toevoegen van de positieve controle aan de mix. Een PCR-kast (PCR work station) met een UV-lamp kan hiervoor gebruikt worden om verspreiding van de positieve controle en daarmee contaminaties te voorkomen. De PCR-cupjes worden afgesloten zodra het DNA is toegevoegd en getransporteerd naar de PCR-apparatuur, die bij voorkeur buiten het laboratorium is geplaatst.<\/p>\n\n\n\n
Hoewel twee afzonderlijke ruimtes de voorkeur hebben, kunnen eDNA-extractie en bereiding van PCR-reagentia ook in een enkele ruimte worden uitgevoerd. In plaats daarvan kunnen twee PCR-kasten met UV-lampen worden gebruikt. Deze kasten zijn te beschouwen als aparte werkruimtes.<\/p>\n\n\n\n
Er worden specifieke trainingen\/cursussen gegeven om zowel de theorie alsook de verschillende eDNA-technologie\u00ebn te kunnen doorgronden en beheersen, met als doel een gegarandeerde en volledige implementatie van de verschillende technieken in uw laboratorium.<\/p>\n\n\n\n